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更新時(shí)間：2015-12-09
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SPE技術(shù)儀器裝置固相萃取柱的重復(fù)使用?
固相萃取柱生產(chǎn)廠商一般都強(qiáng)調(diào)其固相萃取柱是一次性使用的。但在實(shí)際工作中，人們?yōu)榱私档统杀就Ｍ滔噍腿≈軌蚨啻问褂?。我們?cè)?jīng)對(duì)美國(guó)瓦瑞安公司生產(chǎn)的Bond Elut Certify 鍵合硅膠固相萃取柱的重復(fù)使用的可能性進(jìn)行過評(píng)估 (J. Chromatogr. 137:619 ; 1993)。當(dāng)樣品基液是漿時(shí)，這種固相萃取柱在經(jīng)過再生后可重復(fù)使用2-3次 (保持80%以上的回收率)。也有人報(bào)道固相萃取柱可重復(fù)使用10次 (J. Chromatogr. 307:371 ;1986)。新型的薄膜型固相萃取柱的再生相對(duì)較為容易，反復(fù)使用的次數(shù)也會(huì)多一些。有人曾經(jīng)試驗(yàn)重復(fù)使用這種固相萃取柱15次之多。對(duì)固相萃取柱的重復(fù)使用在很大程度上取決于樣品基液的復(fù)雜程度。樣品基液越復(fù)雜，SPE柱重復(fù)使用的可能性就越小。
固相萃取膜片(SPE disk)的重復(fù)使用也是如此，在很大程度上取決于樣品基質(zhì)。如果樣品中的干擾物在固相萃取膜片上不保留，或雖然保留，但通過一定的清洗、再生溶劑處理后能夠基本恢復(fù)其原有的功能，則可以考慮重復(fù)使用。有的可以重復(fù)使用高達(dá)10次。
對(duì)固相萃取材料的重復(fù)使用必須謹(jǐn)慎。首先，使用過的固相萃取柱必須進(jìn)行再生。而且是在使用完后進(jìn)行再生。其次，對(duì)再生后的固相萃取柱必須進(jìn)行評(píng)估以保證其本底和回收率都可以接受。另外，還要考慮一下再生的成本是否值得。
SPE技術(shù)儀器裝置固相萃取柱的重復(fù)使用
11. 固相萃取中的常見問題
問 題 | 原 因 | 解 決 方 法 |
在用反相SPE柱萃取時(shí)，洗脫餾份中有水。 | 1. 分析物洗脫之前SPE柱沒有很好的干燥。
| 1. 用氮?dú)饣蚩諝飧稍颯PE柱：用20-100微升含60-90%甲醇的水將SPE柱上的殘留水分除去。 |
zui后餾份中含有干擾物。 | 1. 干擾物與分析物被同時(shí)洗脫。
2. 干擾物來自SPE柱。 | 1. 在洗脫分析物之前選用中等極性的溶劑將干擾物洗滌出SPE柱?？蓪煞N或更多中兼容的溶劑混合以達(dá)到不同的極性。 選用對(duì)分析物親合力更大而對(duì)干擾物親合力低的SPE柱。 用兩根不同極性的SPE柱以除去干擾物。如反相柱然后離子交換柱或硅膠柱。 2. 在柱子預(yù)處理之前用洗脫溶劑洗滌SPE柱。 |
SPE柱流速降低或阻塞。 | 1. 樣品存在過多的顆粒。 2. 樣品溶液粘度太大。 | 1. 對(duì)樣品進(jìn)行過濾或離心。 2. 用溶劑對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。 |
反相柱從固態(tài)樣品中用萃取非極性分析物。 | 1. 分析物不在液體溶液中。
| 1. 用甲醇、異丙醇或乙腈對(duì)樣品進(jìn)行均漿處理。然后過濾或離心，再用水對(duì)清液進(jìn)行稀釋為含水量為70-90%的水溶液。 |
用正相柱從固態(tài)樣品中萃取分析物。 | 1. 分析物不在液體溶液中。
| 1. 用非極性溶劑 (如: 正己烷、石油醚、氯仿等)均漿。 |
用正相柱從脂肪樣品中萃取分析物。 | 1. 脂肪可與分析物一起被洗脫出來或降低SPE柱的吸附容量。 | 1. 用正己烷溶解脂肪。冰凍除去凝結(jié)的脂肪。 |
用反相柱從含蛋白質(zhì)的溶液中(、清、漿)萃取分析物。 | 1. 分析物與蛋白質(zhì)鍵合使分析物通過SPE柱而沒有被保留。
| 1. 通過改變樣品的pH值或用水對(duì)樣品稀釋破壞蛋白鍵合。 2. 加酸除蛋白質(zhì) (如: HCIO4、TFA、TCA)。 3. 加有機(jī)溶劑除蛋白質(zhì) (如: 乙腈、丙酮或甲醇)。離心、然后用水或緩沖溶液將上清液稀釋至有機(jī)溶劑含量少于10%。 |
從含有表面活性劑的溶液中萃取分析物。 | 1. 表面活性劑與SPE柱表面起作用。 | 1. 如果分析物是非離子狀態(tài)，可用離子交換柱除去表面活性劑離子。 2. 用二醇基柱除去非離子化的表面活性劑。 |
用常規(guī)柱 (60Å)萃。取蛋白質(zhì)的回收率低。 | 1. 蛋白質(zhì)體積太大不能進(jìn)入萃取柱的微孔。 2. 蛋白質(zhì)不可逆地被吸附在反相SPE柱上。蛋白質(zhì)在SPE柱擔(dān)體微孔內(nèi)變性。 | 1. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。 2. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。 |
分析物回收率低 被吸附在萃取柱上 (如分析物與基液一起通過SPE柱) | 1. SPE柱沒有很好地被預(yù)處理。 2. SPE柱的極性不合適。 3. 分析物對(duì)樣品溶液的親合力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)SPE柱的親合力。 4. 當(dāng)大體積水樣品。 5. 通過SPE柱時(shí)，反相柱擔(dān)體失去柱子預(yù)處理時(shí)留下的甲醇。 | 1. 反相柱: 用甲醇、異丙醇或乙腈處理柱子，然后用稀釋樣品的溶劑處理柱子。注意不能讓SPE柱變干。 2. 選擇對(duì)分析物有明顯選擇性的SPE柱。 3. 改變極性或樣品溶液的pH使分析物在樣品溶液中的親合力降低。 4. 在樣品溶液中加入1-2%的甲醇或異丙醇或乙腈。 |
分析物回收率低 分析物沒有被洗脫出SPE柱 | 1. SPE柱的極性不合適。 2. 洗脫溶劑不夠強(qiáng)，無法將分析物從SPE柱上洗脫。 3. 洗脫溶劑體積太小 4. 分析物被不可逆地吸附在SPE擔(dān)體上。擔(dān)體-分析物作用力太強(qiáng)。 | 1. 選擇其它低極性或選擇性弱的SPE柱。 2. 改變洗脫溶劑的pH值以增加其對(duì)分析物的親合力。 3. 增加溶劑體積。 4. 反相: 選擇疏水性弱的擔(dān)體。如果原來用的是C18，則改為C8、C2或CN。 陽(yáng)離子交換: 用羧酸取代苯磺酸。 陰離子交換: 用伯、仲胺代替叔胺。 |
萃取重現(xiàn)性差 | 1. 在添加樣品之前SPE柱已枯。 2. SPE柱超容量。 3. 樣品過柱流速太快。 4. 洗脫液流速太快。 5. 分析物在樣品中的溶解度太大，分析物在樣品過柱時(shí)與樣品同時(shí)通過柱子而沒有被保留。 6. SPE柱用極性溶劑處理而洗脫溶劑是不兼容的非極性溶劑。 7. 洗滌雜質(zhì)用的溶劑太強(qiáng)，部分分析物與雜質(zhì)同時(shí)被從SPE柱洗滌。分析物在這一步損失的多少取決于洗滌溶劑的流速、SPE的特性以及洗滌溶劑的體積。 8. 洗脫劑的體積太小。 | 1. 重新進(jìn)行SPE柱預(yù)處理。 2. 減少樣品量或選擇大容量柱。 3. 降低流速。特別是離子交換時(shí)流速應(yīng)低于5 mL/min。 4.在使用外力之前讓洗脫液滲透過柱。兩次500微升洗脫可能比一次1000微升更有效。 5. 通過改變樣品極性或pH值而改變分析物的溶解度。 6. 在使用非極性溶劑之前對(duì)SPE柱進(jìn)行干燥。
7. 降低洗滌溶劑的強(qiáng)度。
8. 增加洗脫溶劑的體積。 |
SPE技術(shù)儀器裝置固相萃取柱的重復(fù)使用
參考資料：杭州聚同電子有限公司
固相萃取裝置原理及特點(diǎn)
固相萃取(Solid-Phase Extraction 簡(jiǎn)稱ＳＰＥ)是 近年發(fā)展起來一種樣品預(yù)處理技術(shù), 由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)結(jié)合發(fā)展而來 , 主要用于樣品的分離、純化和濃縮,與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率、更有效的將分析物與干擾組分分離減少樣品預(yù)處理過程，操作簡(jiǎn)單，省時(shí)，省力。廣泛的應(yīng)用在、食品、環(huán)保、商檢、農(nóng)藥殘留等領(lǐng)域
⑴ 小心地取出固相萃取裝置，輕放于工作臺(tái)上。
⑵ 小心地取出SPE裝置上蓋板(輕拿輕放以免碰壞小管)，將標(biāo)準(zhǔn)試管插入真空倉(cāng)內(nèi)隔板孔中，然后，將上干蓋板蓋好，并保證蓋板下導(dǎo)流管與試管一一對(duì)應(yīng)好，蓋板方形密封圈與真空倉(cāng)有很好的密封性。如果不易密封，可用橡皮箍箍緊，以增加密封性。
如果選購(gòu)了獨(dú)立調(diào)節(jié)就要先將調(diào)節(jié)閥插入蓋板萃取孔中；
⑷ 如果一次不需要做12或24個(gè)樣品，不用的萃取孔插上針管密閥；
⑸ 如選購(gòu)了獨(dú)立調(diào)節(jié)閥，將不用的萃取孔的調(diào)節(jié)閥旋鈕旋到水平密封狀態(tài)；
將固相萃取小柱插入到上蓋萃取孔中或閥孔內(nèi)（將調(diào)節(jié)閥旋鈕旋到直立打開狀態(tài)）；用膠管連接萃取裝置和真空泵，擰緊壓力調(diào)節(jié)閥門；
⑺ 將需要萃取的樣品或試劑分別注入到萃取柱中，啟動(dòng)真空泵，則萃取柱中的樣品將在負(fù)壓力的作用下通過萃取柱流到下面的試管中。此時(shí)可通過調(diào)節(jié)減壓閥來調(diào)節(jié)控制液體流速。
（8） 待針管內(nèi)液體抽完后關(guān)閉真空泵，將富集柱從裝置上拔下，取下裝置上蓋板，拿出試管倒掉。
如不想用試管接液，可將試管架取出，放入合適大小的容器，*次萃取后取出倒掉。
再將干凈試管放入裝置，蓋好上蓋板，插好SPE小柱，用所需萃取溶劑加入針管，啟動(dòng)真空泵，至液體抽干后關(guān)掉電源，取出試管備用。萃取制樣完畢。
將試管放入氮?dú)獯蹈蓛x中用氮?dú)獯祾邼饪s，制備完畢。
處理好試管中的溶劑，并將試管沖洗干凈以備再用。
為了節(jié)省SPE柱的使用成本，每次使用后，應(yīng)將SPE柱用淋洗液沖洗干凈，保證其填料的活性。
參考資料：杭州聚同電子有限公司
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